LC 日常维护-防止意外停机的简单步骤

• 提高仪器性能。

• 防止延长的、计划外的停机时间。

• 提高数据质量和一致性。

虽然很容易从“一盎司的预防胜于一磅的治疗”（本杰明·富兰克林）的建议中看出智慧，但要花时间采取预防措施要困难得多。但是，尽管日程安排很忙，工作量很大，但提高实验室效率的**方法之一是花时间进行预防性 LC 维护。通过制定一个确保您的仪器运行良好的定期计划事件计划，您将**限度地减少意外维修的计划外停机时间，延长组件寿命，并确保更一致的性能。所有这些共同构成了一种具有成本效益的策略，可保护数据质量并提高整体实验室生产力。

LC 日常维护计划应针对仪器的可维修部件制定具体的检查、清洁和更换计划。这包括流动相、泵、自动进样器、色谱柱/防护装置和检测器。具体协议和建议因制造商和型号而异，因此在制定程序时请务必查阅仪器手册。此外，请考虑您正在运行的方法和样品的类型——脏样品的高通量测试需要比分析更少样品或更清洁的基质时更频繁的服务。在本文中，我们将探讨日常 LC 维护的每个重点领域，并就开发对您的实验室有效的目标程序提供指导。

常规 LC 维护组件

流动相

许多性能和故障排除问题可以追溯到流动相问题，主要与污染物和泄漏有关。污染物可能是微生物或微粒，最终会导致不正确和可变的流动相比率、系统堵塞和高背压。为避免这种情况，请仅使用由 HPLC 级溶剂制成的新鲜过滤流动相，并定期清洁或更换溶剂入口过滤器。玻璃过滤器既便宜又环保，因此**定期更换它们。不锈钢过滤器可以通过在异丙醇中进行超声处理来更换或清洁（请注意，玻璃过滤器不应进行超声处理，因为它们可能会破裂和/或脱落碎片）。始终将准备好的流动相储存在干净的瓶子中，并盖上盖子以防止污染。务必使用带安全盖的合适瓶子；不建议将流动相储存在盖有实验室薄膜或箔的旧溶剂瓶中，因为这会使挥发性溶剂和添加剂蒸发，从而改变溶液的浓度。

因为微粒也可能污染脱气机，所以用异丙醇冲洗脱气机管线很重要（如果使用缓冲流动相以防止沉淀，请先用水，然后用异丙醇）。脱气管会随着时间的推移而变脆并破裂；这会导致设备变得非常嘈杂，表明需要修剪或更换管道。维护详细的仪器日志以跟踪此类症状将帮助您在设置例行 LC 维护计划时确定适当的时间间隔。

泄漏是另一个常见的流动相问题，可以通过良好的日常维护计划将其最小化。少量泄漏会导致样品损失、保留增加和信号下降，而大量泄漏会导致仪器自动关闭，从而停止数据收集，并可能意味着您需要重新运行批次。为防止泄漏，包括定期检查管道和接头日常维护计划中的水分和残留物。确认流动相管和色谱柱之间的末端接头已拧紧并固定，但注意不要拧得过紧，因为这会损坏接头。您可能需要卸下配件并检查是否有任何损坏迹象，或者只是定期更换。高压配件比标准配件更耐用，是一种有用的替代品，可以延长维护事件之间的间隔。

您的日常 LC 维护计划应辅以流动相组件和系统管道的日常检查。在开始分析之前，检查流动相的透明度和制备日期，确保流动相和废液容器中的液位充足，并用干燥的实验室纸巾追踪管路和接头；这将帮助您发现仅通过目视检查就可能遗漏的小泄漏。

泵

二元和四元泵是系统的另一部分，应包含在任何常规 LC 维护计划中。可维修的零件包括活塞、活塞密封件、入口和出口止回阀以及放气阀滤芯。活塞和阀门是泵中更耐用的部件，每年只需更换一次或两次。只需用水：甲醇 (50:50) 擦拭它们并在更换活塞密封件时检查它们的磨损情况就足够了，但请务必将更换零件放在手边，以便在需要时可以使用。

相比之下，活塞密封件和放气阀滤芯需要更频繁的注意。活塞密封件会迅速磨损，尤其是在使用高缓冲浓度流动相的情况下，并且通常需要每三到六个月更换一次。如果您的系统有密封冲洗选项，请检查以确保有足够的新鲜密封冲洗溶液（通常为 90:10 水：异丙醇）供应，作为日常维护计划的一部分。对于闭环密封清洗套件，经常检查密封清洗液的液位并定期更换。遵循这些步骤并确保密封冲洗管线已正确灌注将有助于**限度地延长泵内耗材的使用寿命。

清洗阀滤芯可能会因收集泵密封磨损产生的碎屑而变脏，通常需要同时更换。泵头泄漏、保留时间不一致和压力不稳定可能表明活塞密封件正在损坏并需要更换，而高背压或不规则峰形可能表明清洗阀滤芯堵塞。仔细查看仪器日志可以帮助您确定为您的仪器设置的**维护间隔。

除了遵循良好的常规 LC 维护计划外，您还可以通过将其存放在有利的条件下来进一步延长泵的使用寿命。当泵不使用时，即使只是过夜，首先用 90% 的水冲洗它约 15 分钟以去除任何缓冲盐，然后用 100% 的有机物冲洗。然后，关闭泵或将流量降低至 0.1 mL/min。

自动进样器

为防止泄漏、堵塞和残留，应经常检查喷油器阀转子密封件、定子、定子面、针和针座，并根据需要进行更换。检查这些部件时，请特别注意检查自动进样器阀门组件（定子、定子面等）是否有堵塞或划痕。一般来说，转子密封件和针座需要比定子和针更频繁地更换。与 LC 系统的其他部分一样，具有高浓度缓冲盐的流动相会加速磨损，因此可能需要通过更频繁的 LC 维护来抵消它们的使用。防止自动进样器出现问题的**方法之一是在进样前过滤或离心样品以去除微粒。注射器过滤器和过滤瓶让这成为一项非常值得花时间的简单任务，因为它有助于防止进样阀损坏和由于堵塞导致的背压增加。

色谱柱和保护柱

作为 LC 维护的常规部分，检查色谱柱连接（以及所有其他系统连接）是否有泄漏、卡住的管子和松动的接头。更换管路时，请使用较短的窄管路以**限度地减少系统体积，从而减少峰分散和分离度损失。始终检查管道末端以确保干净、方形切割，因为不规则切割会导致形成空隙体积。此外，如果接头泄漏，**更换接头，因为它可能已损坏，进一步拧紧会加剧问题。

柱温箱本身没有可维修的部件，但在不使用柱温箱时关闭柱温箱将有助于延长柱子和柱温箱的使用寿命。过滤是另一种延长色谱柱寿命和维修间隔的方法。使用保护柱或UltraShield UHPLC 柱前过滤器可提供出色的颗粒物和污染物防护。一定要记录基线压力，因为压力增加是堵塞的良好迹象；根据您在日志中观察到的压力趋势设置保护柱更换计划。

当需要更换保护柱时，检查您的系统压力是否恢复正常。如果没有，则可能需要重新生成或更换色谱柱。要再生 HPLC 或 UHPLC 色谱柱，请使用一系列溶剂按色谱柱上所示的方向冲洗。每种溶剂至少使用 20 倍柱体积，并按表 I 中所示的顺序冲洗。

表 I： LC 色谱柱再生的溶剂冲洗顺序。

安装新的或再生的 LC 色谱柱后，请务必遵守所有使用指南，包括 pH 限制、温度限制和储存溶剂。除了仪器日志之外，维护色谱柱日志是防止色谱柱恢复使用或准备用于不同方法时出现问题的绝佳方法。

探测器

探测器很复杂，客户可维修的部件相对较少。定期检查和清洁方案应仔细遵循仪器手册。峰值或基线噪声的增加可能表明灯泡出现故障，因此建议手头有一个额外的。在尝试安装之前，请务必查阅您的仪器手册。

制定有效的时间表

有效的例行 LC 维护计划的最基本要素是按照计划的时间表定期执行。为了**限度地提高有效性、**限度地减少中断并避免因仪器意外故障而导致的停机时间，应根据仪器日志历史记录、样品基质、样品运行数量和方法细节（例如，使用缓冲液、添加剂或衍生化试剂）来设置时间表。在更苛刻的方法条件下大量用于分析脏样品的仪器将需要比那些用于分析相对清洁样品的少量仪器更频繁的维护。

以性能认证返回服务

在任何 LC 维护事件之后，无论是常规还是非常规，都必须在仪器恢复使用之前对其进行测试。这是通过性能鉴定 (PQ) 测试完成的，这在受监管的实验室中是强制性的，但对不受监管的实验室也有好处。性能鉴定的目的是凭经验证明整个系统（硬件和软件组合）将按预期运行并满足预定规格。性能测试应按照标准操作程序进行，包括测试和限制，以证明仪器能够满足与其预期用途相关的规范。

常见测试包括泄漏检查、泵流量准确度和稳定性、柱箱和自动进样器温度、波长准确度、驻留体积和梯度准确度、信噪比、线性度、准确度、精密度和交叉污染。实验室应根据用于常规样品分析的方法确定哪些测试和验收标准是合适的。发生维护事件后，首先测试受影响的模块是否正常工作，然后对整个系统进行评估。例如，更换泵密封件后，首先评估泵的流量精度和准确性以及混合；然后，进行定量和定性色谱评估。合格的仪器可以恢复使用，但任何出现故障的仪器都需要进行根本原因分析、维修和进一步的 PQ 测试。

一旦仪器被批准使用，就应该使用一些日常检查来验证准备情况和性能能力。仔细记录性能测试结果和日常检查将提供关于“好”的有价值的图片，并将更容易诊断潜在问题或确定何时需要更换耗材。每个实验室都应制定每日方案，但通常包括记录系统压力和保留时间检查，以及每种分析方法中定义的系统适用性测试。

概括

花时间进行定期 LC 维护是确保您的仪器性能良好并始终如一地提供可靠结果的**方法之一。通过根据您的特定系统、样品和方法开发常规程序，您可以避免因故障排除和维修而导致的长时间停机，并**限度地减少因 QC 故障或仪器停机而导致的批次丢失重新运行的需要。具有良好的流动相管理；妥善保养系统组件（泵、自动进样器、色谱柱/防护装置和检测器）；及相关的性能鉴定测试；您可以**限度地延长仪器的使用寿命、正常运行时间并保护数据质量。