广州仪人分析仪器有限公司

别八卦王宝强离婚案了,我们来看看蛋白分析的那些三氟乙酸

要说最近全民媒体最狂热讨论的事项,非王宝强离婚案莫属了。

从上周日(8月14日)凌晨,王宝强公布了自己与妻子马蓉离婚的消息后,这个话题迅速上升为中国热议话题的榜首。根据新浪微博的官方统计,话题#王宝强离婚#已经有超过50亿的阅读量。

至今已十多天了,热度未消,而王宝强也空降微博明星榜**位,引发全民关注。




大家最近在各平台也看到不少有关的文章报导,有说婚姻的、有说法律的,甚至还有关于育儿的。然而这些跟我们的科研工作并没有什么卵关系~

大家在关注离婚案心疼宝宝的同时,跟着今天小编来点不一样的吧,不讲谁谁谁的马蓉,只讲讲蛋白和多肽分析的那些三氟乙酸。




很多做过蛋白和多肽分析实验的都知道,要往里面添加三氟乙酸。但三氟乙酸到底是什么东东呢?为什么要添加呢?对色谱柱寿命会有影响吗?相信大部分实验人员都还不大懂的。现在,掌声有请我们英俊潇洒风流倜傥学贯中西的Dr.Lu。




Hi,我是Dr.Lu。广州绿百草的专业技术人员。

今天我和美花花一起,和大家讲解蛋白和多肽分析的那些三氟乙酸


小Lu

美花花

大家好,我是花姐。真有点不好意思,又是我。

美丽的花姐,一周不见都有点想你了。

小Lu

美花花

小样的,别贫嘴。赶紧的。讲完我还要回去看宝宝呢。




三氟乙酸,到底是什么鬼?
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美花花

呵呵。Dr.Lu,你还是直接上吧。

三氟乙酸(TFA)是一种强羧酸。pKa=-0.23。有轻微的毒性,化学反应式:CF3COF+H2O=CF3CO2H+HF。无色挥发性发烟液体。与醋酸气味相似。有吸湿性及刺激臭。能与水、氟代烷烃、甲醇、苯、乙醚、四氯化碳和己烷混溶。

小Lu

美花花

Lu男神,真是不明觉厉。





在HPLC中有什么卵用?
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美花花

LuLu欧巴,我今天做了多肽分析实验。

效果怎样?

小Lu

美花花

开始用普通流动相和C18色谱柱,拖尾异常严重。

肯定的,这主要是因为色谱柱中疏水键合相会残留部分硅醇基,实验中蛋白质和多肽会与其极性表面作用,从而导致拖尾。

小Lu

美花花

原来是这样~

后来前辈教我,要添加三氟乙酸。你能想象多神奇吗?

简直是神仙水,峰型马上棒棒哒。

流动相中的三氟乙酸可以跟刚刚说到的硅醇基以多种模式相互作用,从而改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。

小Lu





优于其它离子修饰剂?
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美花花

Dr.Lu,我知道离子修饰剂其实有很多,为啥做蛋白分析**要用三氟乙酸?

主要原因是三氟乙酸易挥发,能很方便的从制备样品中出去。

另外,三氟乙酸的紫外**吸收峰低于200nm,对多肽在低波长处的检测干扰很小。

小Lu

美花花

哦~ 原来是易除去,干扰小!




实验中如何用呢?
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美花花

小LuLu,这个问题我知道!!

上次我做实验,三氟乙酸添加在流动相中的浓度是 0.1%。

没错,一般是0.1%。

另外,改变三氟乙酸的浓度,可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性哦~ 这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析(如多肽的指纹图谱)的信息量是非常有益的。

小Lu

美花花

你说三氟乙酸是易挥发的,那浓度岂不是很难控制?

恩恩,对的。如果配置时间长了,就会挥发一些,改变了浓度。所以配置好一定要封闭好,防止挥发呢。

小Lu

美花花

嗦嘎~






浓度大 Or 小?
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美花花

三氟乙酸真是蛋白分析的神仙水,那是不是倒越多越好?


然而并不是。

前面我有提到,三氟乙酸是强酸,所以在实际使用过程中容易残留从而导致色谱柱键合相水解加剧,减少柱子寿命。

小Lu

美花花

影响柱子寿命??!!!

这问题可大了,我还是倒少点,安全!!


汗~~!!

当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时,大部分色谱柱做出来的峰展宽和拖尾就变得十分明显。特别是部分封端做得不大好的色谱柱,要添加很多才能达到要求。所以我们还是要根据不同色谱柱的情况,调整浓度哦~

小Lu

美花花

真是鱼与熊掌不可兼得!

那Dr.Lu,有没有色谱柱是不用添加三氟乙酸,就能很好分析蛋白和多肽的呢?

还是要看实验的要求!

有一些聚合物基质色谱柱,以及优化键合相C18色谱柱,在不添加三氟乙酸的情况下也能做出不错的峰型。例如英国Hichrom旗下的ACE 300? 多肽分析反相 C18柱。

但是三氟乙酸会影响蛋白质和多肽的选择性,一般都是建议加上,从而更好的保证峰型。

小Lu

美花花

恩恩,根据实验要求匹配方案,才是正道呢。




以下是刚刚Dr.Lu提到的ACE色谱柱:


ACE生物分析300?方法开发工具包(四)
? 包含ACE C18-300,ACE C4-300和ACE苯基-300固定相
? 适合零起点蛋白质和多肽的方法开发
? 包含从微孔(0.5毫米)到通用分析(4.6毫米)的尺寸
? 超惰性300?阶段提供优异的峰形和重现性

ACE300?系列超惰性HPLC柱
均采用了先进的技术制造,几乎消除硅醇基和金属污染对肽,蛋白质、其他高分子量的生物大分子分离的负面影响;

该系列的超惰性特性体现在,如流动相中仅使用低至0.005%的TFA仍能保持很好的峰对称度;

而市面上其他品牌的300?系列大多使用0.01%TFA表现出了很差的峰型,从而间接降低了灵敏度的运行能力。



1)甘氨酸 - 酪氨酸    2)催产素    3)血管紧张素Ⅱ     4)神经降压素



各位亲,蛋白质和多肽分析如何使用三氟乙酸,你懂了吗?

对本期的话题还有什么疑问吗?对下期话题有什么建议?赶紧留言吧!Dr.Lu会很认真的解答各位的问题的哦~

注:本文图片和部分资料来源于网站。



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